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如何切出理想的石蜡切片
文章来源:未知      发布者:admin

如何切出理想的石蜡切片

 

石蜡切片是组织学常规制片技术中应用广泛的方法。但在石蜡切片过程中,经常会遇到一些问题:修整蜡块总修不平整?切片时容易碎片、翻卷?摊片时总是铺不平整?

1.正确固定

  ·  组织离体后,必须在1小时内固定。

  ·  固定液须是组织体积的4-10倍,浓度准确,过稀或过浓都会影响组织形态和固定效果。如发现固定液变质,如甲醛液体产生白色沉淀,应立即更换。

  ·  固定温度宜室温或放于35-37℃的全封闭组织处理机内,温度过高,会加快组织自溶和过度收缩,破坏细胞内的抗原和DNA。

  ·  固定时间不超过40小时,根据室温和标本不同而调整。

2.恰当脱水

脱水的关键是使低浓度的酒精脱水时间和高浓度酒精脱水时间正确搭配。低浓度酒精可以使组织收缩减少,更好切;高浓度酒精使组织脱水更彻底。

一般情况下,标本脱水时间(35℃)为:75%酒精1.5小时、85%酒精2小时、95%酒精(2次)各1.5至2小时、纯酒精(2次)各1.5至2小时。小标本脱水时间与大标本差异不大,一般没必要分开(小标本发脆往往是纸包太厚或相互粘在一起,组织脱水不彻底引起的。如果时间紧急,也可适当缩短脱水时间,脱水时间长短,与室温高低密切相关,同时也与组织的厚薄、组织类型、组织固定的程度等条件有关)。

 

脱水是否彻底,直接关系到组织是否能充分透明。如果脱水时加温过高(超过50℃),或使用丙酮等,容易导致组织收缩过度和组织发硬发脆。组织脱水引起的组织发脆有三种原因:

  ·  组织固定不佳,酒精起到固定作用,从而引起组织质地发生改变。

  ·  组织本身质地因素,如小动物肝脏,在切片时温度过低导致。

  ·  假脆,由于脱水不足,组织在浸蜡时,蜡无法渗透到组织中去,组织在高温下“干烤”导致发硬发脆,切片会出现粉粉的或一丝丝的现象,子宫肌瘤等较硬的组织还会有一棱棱的现象,甚至会整块往外崩;严重脱水不足的组织中间发软,甚至还会有水。

3.石蜡切片操作要点

  ·  切片前,把切片机上相关锁杆或螺旋拧紧,否则可能出现跳片、切片厚薄不均现象。

  ·  刮净包埋盒周边的余蜡,否则样品夹持可能松动,影响切片质量。

  ·  正确修块,先粗修,厚度大约在15-30微米,质地较硬的组织或较小的组织应再薄一些。粗修至组织全部暴露后,再进行细修。

  ·  选择蜡块冷冻方式,冰盒优于冷冻台。使用冰盒能加水润湿蜡块,冷冻速度快,体积小,使用成本低,无须外接电源。

  ·  切片时轻握手轮,用力均匀轻柔,摇速不宜过快或过慢。过快会导致切片厚薄不均,切片难以展开;过慢会使切片增厚。切片要求完整、薄、均匀。

在切片后,先把切片放入冷水,再移至热水,这样片子会较薄,皱褶和气泡也少。展片水温应在42-55℃之间,这和包埋蜡的熔点有关。水温过高,会引起组织细胞散开,水温过低,切片皱褶无法摊平。

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